FAQS：StressMarq神经退行性疾病相关蛋白

StressMarq Biosciences 已开发出多种不同形式的神经退行性疾病相关蛋白的产品，包括 α-突触核蛋白、β-突触核蛋白、γ-突触核蛋白、Tau、淀粉样β蛋白、SOD1 和 TTR的预制原纤维(PFFs)、寡聚体和单体形式的蛋白制剂。StressMarq的目标是成为开发和提供具有病理活性的蛋白聚集体的全球领导者，帮助科学家构建疾病模型，并加速神经退行性疾病的药物研发。

保存与运输 | 神经退行性疾病相关蛋白

1. 这些蛋白如何运输？

StressMarq 的神经退行性疾病相关蛋白(预制原纤维PFFs、寡聚体和单体*)均以冷冻形式通过干冰运输。  

*注意: β淀粉样蛋白单体(货号: SPR-485)单独订购时不需要干冰运输。但如果与其他神经退行性疾病蛋白一同订购，则将与其他产品一同采用干冰运输，以节省运输成本。

2. 这些蛋白如何保存？

详情请参考网页:  神经退行性疾病相关蛋白操作指南

这些蛋白如何解冻？

详情请参考网页: 神经退行性疾病相关蛋白操作指南

重要事项: 预制原纤维PFFs切勿放置在冰上或4°C环境中。

3. 100µg规格的蛋白可以分装吗？

如果您不打算立即使用该产品，通常建议在初次解冻后将其分装为适合您实验需求的 aliquot(小份量)，然后再进行冷冻。首次分装后，不建议再次分装。反复冻融可能会降低产品的活性。同时，也不建议对分装后的样品进行速冻(flash-freeze)。

质量控制 | 神经退行性疾病相关蛋白

1. 这些神经退行性疾病相关蛋白的纯度是如何测定的？

这些神经退行性疾病相关蛋白的纯度是在纯化后通过SDS-PAGE进行测定的。此外，还会对预制原纤维(PFFs)进行沉降实验，以评估其中可溶性蛋白的含量，并确定有多少单体蛋白已转化为纤维。

2. 对预制原纤维(PFFs)进行了哪些聚集活性检测？

我们通过硫磺素T(ThT)检测法评估α-突触核蛋白和tau蛋白预制原纤维(PFFs)的聚集活性。如需了解更多详情，请参考α突触核蛋白硫磺素T检测实验步骤 或Tau蛋白硫磺素T检测实验步骤

3. 这些蛋白产品都进行了哪些质控(QC)检测？

对于α-突触核蛋白和 Tau蛋白预制原纤维(PFFs):
• 通过 SDS-PAGE检测纯度
• 采用沉降实验确认绝大部分单体已转化为纤维
• 以硫磺素 T(Thioflavin T)检测聚集活性
• 通过原子力显微镜(AFM)或透射电子显微镜(TEM)验证结构
• 标准 QC 流程还包括内毒素检测和无菌检测

β淀粉样蛋白寡聚体和预制原纤维PFFs:
• 使用β淀粉样蛋白抗体(6E10)进行 Western Blot，确认寡聚体/纤维形态。
• 通过原子力显微镜(AFM)或透射电子显微镜(TEM)验证结构。
• 标准 QC 流程同样包括内毒素检测和无菌检测。

实验步骤｜神经退行性疾病相关蛋白

1. 我该如何决定在我的实验中使用哪种预制原纤维(PFFs)？

建议您浏览“神经退行性疾病相关蛋白 ”的页面，来了解 StressMarq 提供的各类产品。页面还附有实验步骤, 操作指南 以及常见问题解答，供您参考。

如您需要我们协助您挑选产品，请发送邮件至 tech@neobioscience.com，并注明您的实验条件与研究目标，我们将尽力为您推荐合适的产品。

2. 是否有使用PFFs时的超声处理(sonication)方案可供参考？

超声仪有多种类型和型号(如水浴式、探头式等)。由于不同实验室或研究人员可能使用不同种类或型号的超声仪，我们建议您参考我们网站上的“超声处理方案”页面中的信息: 超声处理实验步骤 ，研究人员始终需要根据自己的具体实验、实验室条件和所使用的超声仪对方案进行优化。

3. 我在哪里可以找到这些蛋白的相关实验方案？

请参考我们的 神经退行性疾病相关蛋白实验步骤页面，该页面包含了硫黄素T(ThT)实验、细胞培养、体内实验等相关的实验方案。

4. 这些蛋白的浓度是多少？我该如何计算摩尔浓度？

α-突触核蛋白和tau蛋白的标准浓度为2 mg/mL，β淀粉样蛋白的标准浓度为1 mg/mL。部分α-突触核蛋白和tau蛋白也提供5 mg/mL的浓度(详见各产品详情页的订购信息)。

如需计算摩尔浓度，请使用单体分子量(MW)并按以下公式计算：μM = (μg/L) / (MW，单位为Da)

我们使用单体的分子量进行计算，因为难以确定每个纤维(fibril)中包含多少个单体，因此无法准确计算其具体质量

产品引用｜神经退行性疾病相关蛋白

1. 这些蛋白是否有在科学文献中被引用过？

是的，StressMarq 的神经退行性疾病相关蛋白经常被科学期刊引用。如需查看某款产品的具体引用文献，请在该产品的详情页“Product Citations(产品引用)”栏中查找。例如，α-突触核蛋白PFFs(Alpha Synuclein Pre-formed Fibrils，目录号 SPR-322)的引用信息可参见:  α突触核蛋白预制原纤维(货号SPR-322)引用文献.

您也可以通过以下链接查看StressMarq所有神经退行性疾病蛋白的完整引用列表:   神经退行性疾病相关蛋白引用文献

如您只想查看每种神经退行性疾病相关蛋白的最新引用信息，请参考以下页面: α突触核蛋白, Tau蛋白, β淀粉样蛋白

FAQs | α-突触核蛋白

1. 使用α-突触核蛋白预制原纤维(alpha synuclein PFFs)时，应该选择什么作为对照？

合适的对照取决于所进行的具体实验。通常建议使用制备PFFs所用的起始单体作为对照。例如，可以使用目录号 #SPR-321(单体)作为目录号 #SPR-322(PFFs)的单体对照。每种PFFs所对应的单体来源均可在产品页面的“其他相关信息(Other Relevant Information)”栏中找到。

此外，β-突触核蛋白PFFs也可以作为α-突触核蛋白PFFs的对照，因为它们具备聚集活性。

2. 我可以使用小鼠α-突触核蛋白PFFs在人源iPSC神经元中诱导pSer129病理改变吗？这些PFFs能否在不同物种间有效引发病理种子聚集效应？

我们的人源α-突触核蛋白PFFs(目录号 SPR-322)已被证实可在人源iPSC神经元中诱导产生pSer129病理改变。而小鼠源α-突触核蛋白PFFs(目录号 SPR-324)在体外硫黄素T(Thioflavin T)检测中似乎不能很好地诱导人源单体蛋白发生聚集，尽管两者具有相似的同源性。根据文献报道(Luk et al. 2016)，人和小鼠α-突触核蛋白之间的交叉聚集效率低于同源聚集。

3. α-突触核蛋白单体会自发形成纤维吗？

为防止发生自发纤维化，我们建议在解冻和使用过程中将单体蛋白保持在冰上。即使确实发生了自发纤维化，所产生的聚集物的量也会非常少，因为α-突触核蛋白的聚集通常需要振荡或搅动等外界刺激。

4. α-突触核蛋白PFFs是否已在啮齿类动物中进行过注射？

我们的人源α-突触核蛋白PFFs(目录号 SPR-322)和小鼠源α-突触核蛋白PFFs(目录号 SPR-324)能够诱导内源性α-突触核蛋白发生病理改变，并已在小鼠和大鼠中成功进行注射，诱导出从注射部位向外扩散的α-突触核蛋白病理特征。相关的实验数据和图片可在产品页面中查看。

FAQs | β淀粉样蛋白(Aβ)

1. β淀粉样蛋白(Aβ)纤维和寡聚体的稳定性如何？

在室温下，Aβ 纤维在经历一次冻融循环后仍相当稳定，并在酸性缓冲液中可保存数周；Aβ 寡聚体同样可耐受一次冻融，且在体积排阻层析(size-exclusion chromatography)过程中保持其分子大小不变。

2. Aβ 纤维和寡聚体在使用前是否需要进行超声处理？

Aβ纤维在实验前需要进行超声处理。尽管它们在酸性缓冲液中可溶，但在接触到中性缓冲液后容易发生聚集并变得不溶。因此，我们建议在实验使用前立即进行超声处理。

Aβ寡聚体不需要超声处理。

3. 未聚集的单体是否已从Aβ寡聚体和原纤维中去除？还是其中仍然存在聚集体与单体的混合物？从产品页面所示的WB(Western Blot)图来看，两种产品中都存在单体/二聚体条带。

这些是处于平衡状态的无序蛋白。遗憾的是，无法从寡聚体和纤维体的制备物中完全去除单体，因为单体在过滤过程中很容易发生聚集。因此，这些制备物中很可能仍然残留有一些单体，而且由于SDS会将聚集物分解为单体，因此很难准确量化其中的单体含量。不过，我们在网站上展示的Western blot图像显示了单体、寡聚体和纤维体制备物在相同浓度下电泳的结果，在寡聚体和纤维体样品中，即使存在SDS(它会将聚集物分解为单体)，单体的信号也还不到5%。

FAQs | Tau蛋白

1. 请问你们提供的 Tau 蛋白是否有体内(in vivo)验证数据？”

Tau(K18)P301L 突变型 PFFs(货号: SPR-330)已证实可在注射后九周内在 P301L 小鼠海马中诱导 Tau 蛋白的磷酸化与聚集。有关实验的更多细节请参见产品页面。

2. 请问你们提供超磷酸化的 Tau 蛋白吗？

是的，我们提供多种在杆状病毒/Sf9系统中表达的高度磷酸化Tau单体和纤维。这些产品包括: 野生型Tau单体(货号: SPR-496)和PFFs(货号: SPR-498)，以及Tau P301S突变型单体(货号: SPR-473)和PFFs(货号: SPR-471)。质谱分析显示，杆状病毒表达的野生型Tau最多可达到20个磷酸化位点，而P301S突变型Tau的磷酸化位点可达38个。此外，我们还提供在CHO细胞中表达的、具有N-糖基化和高度磷酸化修饰的Tau P301S突变型单体(货号: SPR-515)和PFFs(货号: SPR-516)。

更多详情请咨询StressMarq中国独家代理商-欣博盛生物

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